爱游戏体育注册β-淀粉酶活性检测试剂盒(DNS比色法)

发布日期: 2022-06-18 08:22:16 | 来源:爱游戏体育app 作者:爱游戏体育app官网下载

  (β-AL)是普遍分布在动物、植物和微生物中的一种巯基酶,作为重要的淀粉水解酶,能够作用于淀粉的非还原端α-1,4-糖苷键,生成葡萄糖、麦芽糖和麦芽低聚糖等,遇到α-1,6-糖苷键即停止作用,生成β-极限糊精,在食品、酿造和制糖等领域具有广泛应用。

  淀粉酶能够催化淀粉水解生成还原糖,进一步与3,5-二硝基水杨酸反应生成棕红色物质,产物在540 nm处具有特征吸收峰,通过吸光值变化即可表征淀粉酶的活性。根据β-淀粉酶不耐热特性,通过加热钝化后测定(α+β)淀粉酶总活力和α-淀粉酶活力,进而计算得出β-淀粉酶的活性。

  测定过程中所需要的仪器和试剂:可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心机、恒温水浴和蒸馏水。

  称取0.1 g样本,加入1 mL蒸馏水后充分匀浆,室温提取15 min(每隔5 min振荡混匀1次),6000 g室温离心10 min,吸取全部上清液使用蒸馏水定容至10 mL,充分混匀即为淀粉酶原液。灭活酶原液的制备:取适量淀粉酶原液,沸水浴处理5 min(密封以防止水分散失),冷却至室温。

  取适量淀粉原液使用蒸馏水稀释5倍后即为淀粉酶稀释液,用于测定(α+β)淀粉酶总活力。灭活酶稀释液的制备:取适量淀粉酶稀释液,沸水浴处理5 min(密封以防止水分散失),冷却至室温。

  吸光值测定:取反应液至1 mL玻璃比色皿中,测定540 nm处吸光值,记为A1测定、A1对照、A2测定、A2对照、A标准和A空白;计算∆Aα=A1测定-A1对照,∆A(α+β)=A2测定-A2对照,∆A标准=A标准-A空白。注:每个测定管均需设一个对照管,空白管只需测定1-2次。

  标准曲线 mg/mL标准稀释液浓度为横坐标(x),以其对应的∆A标准为纵坐标(y),绘制标准曲线,得到线性回归方程y=kx+b,分别将∆Aα和∆A(α+β)带入公式中得到xα和x(α+β)(mg/mL)。

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